1、母種培養(yǎng)：1、麥芽糖酵母瓊脂培養(yǎng)基（MYA）大豆蛋白胨（豆胨）1克、酵母2克、麥芽糖20克、瓊脂20克，加水至1000毫升。2、馬鈴薯葡萄糖酵母瓊脂培養(yǎng)基（PDYA）馬鈴薯300克（加水1500毫升，煮20分鐘，用濾汁）、酵母2克、豆胨1克、葡萄糖10克、瓊脂20克，加水至1000毫升。3、燕麥粉麥芽糖酵母瓊脂培養(yǎng)基（DMYA）燕麥粉80克、麥芽糖10克、酵母2克、瓊脂20克，加水至1000毫升。

2、原種和栽培種培養(yǎng)基：1、小麥稈或裸麥稈，切碎（長2—3厘米），泡濕，裝瓶，高壓滅菌后備用。2、小麥、裸麥，高粱、玉米、小米等谷粒浸泡，煮透至沒有白芯但表皮不破，加2%碳酸鈣，裝瓶，高壓滅菌后備用。3、木屑和小木片各40%、麩皮20%，制作栽培種培養(yǎng)基。

3、接種：可以用培養(yǎng)3—4天的液體菌種接種。若用固體菌種必須加大接種量（菌種/培養(yǎng)料），接種量最少10%，最好15%—20%。

4、培養(yǎng)：接種后，把菌種瓶或袋放在20—28℃培養(yǎng)室中培養(yǎng)。大球蓋菇菌絲生長幾天后，菌絲生長速度會逐漸緩慢，加速菌絲生長的方法是攪拌。用液體菌種接種的無菌麥粒培養(yǎng)基，每隔3—7天搖瓶一次，把菌絲搖斷，可以刺激菌絲再生，能保證菌絲生長旺盛。